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    病毒DNA/RNA提取试剂盒

    上架时间:2020-9-11 16:56:59??????浏览次数:
    • 产品品牌:???凯杰
    • 产品货号:???
    • 产品规格:???250T/盒
    • 检测方法:???
    产品介绍

    病毒DNA/RNA提取试剂盒

    QIAampR UltraSensTM Virus Handbook

    广州健仑生物科技有限公司

    (用于从1ml悬液样品中高效纯化可滤性病毒RNA或DNA)

    1 试剂盒(250份)

    纯化柱

    250

    接收管 2ml

    750

    AC 缓冲液

    230 ml

    AR* 缓冲液

    90 ml

    AB 缓冲液(浓缩)

    22 ml

    AW1* 缓冲液(浓缩)

    95 ml

    AW2* 缓冲液(浓缩)

    66 ml

    AVE 缓冲液

    10×2 ml

    蛋白酶K

    6 ml

    Carrier RNA

    5×310 μg

    2 保存

    2.1 纯化柱室温保存(15—25 ℃,以下室温保存均指该温度),保质期12个月

    2.2干粉状Carrier RNA 可室温保存1年;而溶于AVE缓冲液时需要等分,可于-20℃保存1年

    2.3 蛋白酶溶液可室温保存1年,但于2—8℃环境下可延长保存期

    3 安全

    3.1 衣着:合适的实验室外套、一次性医用手套、护目镜

    3.2 注意事项

    3.2.1 勿将漂白剂或酸溶液直接加入样品准备废液中,当AR缓冲液和AW1缓冲液含有的胍氢可酮和漂白剂结合时会产生高敏性的有害混合物

    3.2.2 缓冲液AC、AB、AR、AW1和蛋白酶K均具潜在危险性,操作时需认真谨慎

    3.2.3 所有实验步骤均需在室温(15—25℃)下进行;样品液可于2—8℃下保存6小时,在-20℃或-80℃下保存更长时间;同时,样品需先用内部控制物处理,以防核酸酶降解

    3.2.4 纯化柱(防交叉污染)

    3.2.4.1 加入样品液时勿弄湿柱子边缘

    3.2.4.2 注意更换有屏障的无核酸酶枪头

    3.2.4.3 防止用枪头触碰柱膜

    3.2.4.4 稍离心除去盖上液滴

    4、设备与试剂

    4.1 乙醇(96—100%)

    4.2 无菌、无核酸酶、有屏蔽的枪头

    4.3 无核酸酶离心管(1.5ml和2ml)

    4.4 一次性无粉手套

    4.5 磷酸盐缓冲液(PBS,当样品样不足1ml时)

    4.6 可调速微型离心机(250—1200×g)

    4.7 振摇孵育器,可加热

    4.8试剂准备

    4.8.1 Carrier RNA

        每管加入310μl缓冲液AVE,制成1μg/μl 溶液,-20℃保存(冻融不能超过3次),每样品最优Carrier RNA量为5.6μg

    4.8.2 缓冲液AB

    加入标明的乙醇体积(96—100%),翻转10次,使得溶液均质,室温保存

    4.8.3 缓冲液AW1*

    加入瓶上标明的乙醇体积(96—100%),室温保存

    4.8.4 缓冲液AW2*

    加入瓶上标明的乙醇体积(96—100%),室温保存

    5、流程

    5.1 1ml处理液

    5.2 细胞溶解,目标物沉淀于缓冲液AC中

    5.3 在缓冲液AR中重新悬浮,并用蛋白酶K除去蛋白

    5.4 加入缓冲液AB,连接,清洗2遍,洗提获得RNA或DNA

    6、实验操作步骤

    6.1 准备

    6.1.1 使样品液温度平衡至室温(15—25℃)

    6.1.2 校核缓冲液AB、AW1、AW2、Carrier RNA等

    6.1.3 使AR缓冲液温度平衡至60℃(水浴锅)

    6.1.4 所有离心操作需在室温下进行

    6.2 吸取1ml 样液至2ml 离心管中(管盖上不能有液体粘附,防污染)

    若不足1ml,需用磷酸盐缓冲液补足,但样液体积应不少于200μl

    6.3 吸取0.8ml 缓冲液AC至样液表面;吸取5.6μl Carrier RNA液体至管盖(6.1μl mix)勿将缓冲液AC和Carrier RNA事先混合,且需加入内部控制物,同时推荐与Carrier RNA混合加入(0.5μl + 5.6μl Carrier RNA),即6.1μl mix

    6.4 盖上盖子,上下翻转3次,涡旋10秒

    6.5 室温孵育10分钟(最多15分钟,不能更久)

    6.6 离心3分钟(1200×g),移除表面液体,收集沉淀(轻弹使沉淀松散,确保盖上无碎物)

    6.7 移入300μl 预热至60℃的缓冲液AR和20μl 蛋白酶K

       为了减少移液步骤,可将缓冲液与蛋白酶K混合,10份,即3.3ml预热缓冲液AR和220μl蛋白酶(多10%),漩涡10秒混合后,分装320μl至每管

    6.8漩涡至微粒完全重新悬浮

       每次漩涡两管(5—10秒),后漩涡另两管,反复循环3—5次(或更多),有助于蛋白消化

    6.9 在振摇孵育器上孵育10分钟,40℃,最高混匀速度

        10分钟已足够长,不允许延长时间

    6.10 稍离心,除去盖上液滴

    6.11 移入300μl 缓冲液AB,漩涡混匀,稍离心

    6.12 小心移取700μl溶解物至纯化柱(装在一2ml收集管上),勿弄湿边缘,盖上盖子,离心1分钟(3000—5000×g)

    6.13 将纯化柱装在新的2ml收集管上(试剂盒中提供),遗弃旧收集管;小心打开纯化柱盖子,移入500μl缓冲液AW1;离心1分钟(6000×g)

    6.14 将纯化柱装在新的2ml收集管上(试剂盒中提供),遗弃旧收集管;小心打开纯化柱盖子,移入500μl缓冲液AW2;最高速离心3分钟(20,000×g)

    为防止离心减速震动导致的滤液黏着在纯化柱上,可额外取一新2ml收集管套上纯化柱,最高速离心1min

    6.15将纯化柱装在新的1.5ml收集管上(非试剂盒中提供)遗弃旧收集管;小心打开纯化柱盖子,移入30μl缓冲液AVE至纯化柱膜上(全部弄湿),离心1分钟(6000×g)

    6.16 重复步骤6.15,当需更多体积时,可适当增加AVE体积,而非提取后稀释

    6.17 RNA保存,-80℃

    备注:初步计算,整个实验过程共需约2—3小时


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